Практическая работа №2 Физиология микроорганизмов. Принципы культивирования бактерий.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №2

ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. ПРИНЦИПЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ

Знание физиологии и методов идентификации чистых культур бактерий является основой микробиологической диагностики инфекционных болезней. Питательные среды необходимы для выделения и идентификации микробов.

Цель: Ознакомление с ингредиентами, используемыми для питательных сред, ростом микроорганизмов на питательных средах (основных, дифференциально-диагностических, синтетических), сухими питательными средами, освоение методов посева и выращивания бактерий в жидкой и плотной питательной среде.

Материалы и оборудование: питательные среды, жидкие (МПБ, пептонная вода), плотные (МПА, среда Эндо, кровяной агар), дифференциально-диагностические (среды Гисса с углеводами, среда Плоскирева или среда Левина), чистые культуры бактерий, выращенные на жидких питательных средах, бактериологические петли, шпатель; спиртовка; термостат с температурой 37 °С. Видео фильм «Питательные среды».

Студент должен знать

1. Особенности питания и дыхания бактерий.

2. Фазы роста и размножения бактерий в жидкой питательной среде.

3. Этапы выделения и идентификации чистых культур.

4. Основные питательные среды.

Студент должен уметь

1. Владеть техникой посевов бактериальной петлей, шпателем.

Задание 1

Посмотрев видео «Питательные среды», составьте схему «Классификация питательных сред» (по их составу, консистенции и назначению).

Задание 2

Посмотрев видео «Способы посева», произвести посев исследуемого материала на плотную питательную среду (по методу Дригальского шпателем, по Голду бактериальной петлей). В тетрадь зарисовать схемы посева.

Задание 3

Внимательно рассмотрите характер роста различных бактерий на жидких, полужидких и плотных питательных средах, используя готовые демонстрационные посевы и материал теоретической части работы. Опишите и зарисуйте рост бактерий на плотных питательных средах (фото в приложении 1). Ответы оформите в таблицу 1.

Таблица 1 – Описание колонии микроорганизмов

Теоретическая часть

Рабочее место, где непосредственно проводится работа с культурами микроорганизмов, требует особенно тщательной обработки. Рабочий стол следует дезинфицировать не только до начала работы, но и после ее окончания. Для протирания поверхности стола можно использовать растворы лизола и хлорамина, а также 70%-ные (по объему) растворы изопропилового или этилового спиртов. В лаборатории не разрешается курить, хранить и употреблять еду, напитки, жевательную резинку. Работать следует в халатах.

Правила работы с культурами микроорганизмов. В лаборатории микроорганизмы выращивают в питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, матрацы и чашки Петри. Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инокуляцией. Перед посевом следует тщательно надписать на пробирке (колбе или чашке Петри) название микроорганизма и дату посева. Надпись делают маркером на стекле или на наклеенной этикетке. Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей, если микроорганизмы выращены на плотной среде. В том случае, когда пересевают культуры микроорганизмов, выросшие в жидкой питательной среде, пользуются стерильной пипеткой. Использованную пипетку следует немедленно перенести в дезинфицирующий раствор, например, 3 - 5%-ный водный раствор фенола или 2%-ный раствор хлорамина, не касаясь ею окружающих предметов.

Характер роста бактерий на питательных средах. В жидких питательных средах при размножении бактерий наблюдают равномерное помутнение среды (5), поверхностный рост в виде пленок (1 и 4), пристеночный (3), придонный рост в виде осадка (2) (рисунок 1 а).

На плотных питательных средах отмечается сплошной рост культуры (в виде газона) или образование изолированных колоний (рисунок 1 б).

Рисунок 1 – Характер роста бактерий в жидких (а) и на плотных (б) питательных средах.

Колония – популяция микроорганизмов, развившихся из одной клетки определенного вида бактерий.

• R –форма - шероховатые с неровными краями (рисунок 2)

• L – форма – гладкие с ровными краями (рисунок 3)

ВНЕШНИЙ ВИД КОЛОНИЙ – ВАЖНЫЙ ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ПРИЗНАК

Рисунок 2 – Палочка Коха (колонии R –формы)

Рисунок 3 – Золотистый стафилоккок (колонии L – формы)

При определении чистоты культуры учитывают морфологию колоний, формирующихся на плотных питательных средах, оценивая следующие признаки:

• профиль – плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный и т.д.;

• форму – округлая, амебовидная, неправильная, ризоидная и т.д.;

• размер (диаметр) – измеряют в миллиметрах; если размеры колонии не превышают 1 мм, то их называют точечными;

•поверхность – гладкая, шероховатая, бороздчатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;

• блеск и прозрачность – колония блестящая, матовая, тусклая, мучнистая, прозрачная;

• цвет – бесцветная (грязно-белые колонии относят к бесцветным) или пигментированная; особо отмечают выделение в субстрат пигмента;

• край – ровный, волнистый, зубчатый, лопастной, ризоидный, бахромчатый и т.д.;

• структуру – однородная, мелко- или крупнозернистая, струйчатая и т.д.;

• консистенцию: колония может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар, маслянистой, слизистой (прилипает к петле), вязкой, пленчатой (снимается целиком), быть хрупкой (легко ломается при прикосновении петлей).

Размеры и многие другие особенности колонии могут изменяться с возрастом и зависят от состава среды. Поэтому при их описании указывают возраст культуры, состав среды и температуру культивирования.

Колонии по характеру форме представлены на рисунке 4.

Рисунок 4 – Формы колоний микроорганизмов

Рисунок 5 – Профиль колонии микроорганизмов

Структуру колоний определяют с помощью лупы или под микроскопом. На рисунке 6 представлены виды структуры колоний.

Рисунок – 6 Структура колоний

Рисунок 7 – Край колонии

1 – гладкий; 2 – волнистый; 3 – зубчатый; 4 – лопастной; 5 – неправильный; 6 – реснитчатый; 7 – нитчатый; 8 – ворсинчатый; 9 – ветвистый.

Приложение 1

Фото колоний микроорганизмов, для выполнения задания 3.

Колония №1 (белая)

Колония №2 Колония №3

Колония №4

Колония №5